葡萄霜霉菌的抗药性检测与科学用药是怎样的 你了解吗?

一、葡萄霜霉病的危害病症

葡萄霜霉病是由葡萄霜霉菌[Plasmopara Viticola(Berk et Curtis) Ber.et de Toni]造成的一种全球性病虫害。现阶段,全世界基本上全部葡萄种植区都是有葡萄霜霉病产生。葡萄霜霉病关键伤害叶子,也可以浸染新梢、卷须、叶茎及幼果等翠绿色嫩幼组织。叶子感病前期在反面产生浅黄色水迹状边沿不清楚的小黑斑,之后慢慢扩张为深褐色不规律形或多角形病斑,数斑相接变为不规律形大斑。湿气大时,在病斑反面造成乳白色霜霉状物质,即病原菌的孢囊梗和孢子囊。病发比较严重时病叶早枯早落。嫩梢被浸染后,前期出現色调浓淡不一的浅黄色水迹状黑斑,后变成深褐色略凹痕的病斑,湿冷时病斑也造成乳白色霜霉。重病时新梢歪曲,生长发育终止,乃至枯萎。卷须、穗轴、叶茎有时候也可以遇害,其病症与嫩梢类似。幼果遇害,病部退色,发硬凹陷,上生乳白色霜霉,很易委缩掉下来,伴随着果实增大,病原菌浸染概率减少,且浸染后病菌生长发育迟缓,可造成 果实表层产生凹型,慢慢变紫,肌肉僵硬,发皱,非常容易掉下来。

二、葡萄霜霉菌的抗药性状况

病菌的抗药性就是指总体目标微生物个人或人群,在持续触碰某类药物一定時间后,对该药物产生可基因遗传的敏感度减少,使药力减少或丧失防治效果的状况。葡萄霜霉病是气传性的流行性感冒病虫害,化学防治是病虫害防治中更为关键的方式之一。葡萄生产制造上常见的内吸性农药杀菌剂关键有甲氧基丙烯酸树脂类(嘧菌酯)、羧基氟苯类(烯酰吗啉)、苯基氟苯类(甲霜灵)、氰基乙酰胺类(霜脲氰)和磺胺咪唑类(氰霜唑)。因为有机化学药物科学研究应用技术性的不健全、使用人有关专业知识的欠缺及其田里服药不科学等造成 预防葡萄霜霉菌多种多样有机化学药物造成抗药性,防治效果已经骤降,严重危害着葡萄产业链的身心健康发展趋势。

三、葡萄霜霉菌抗药性无损检测技术

中国农业科学院植保科学研究葡萄有害生物防治研究组运用叶盘飘浮法检验了不一样种植区葡萄霜霉菌对不一样药物的抗性,另外还产品研发了Taqman-MGB无损检测技术,该技术性不会受到试验原材料、塑造自然环境等外部标准限定,具备方式平稳、检验高效率、敏感度较高、非特异强、阳性劣等优势。

1、传统式检验方式—叶盘飘浮法

(1)试品的收集及解决:将在田里收集的新鮮葡萄霜霉菌病样,房间内再次塑造出新鮮的菌层;

(2)制做叶盘:挑选身心健康的‘里扎马特’新鮮叶子并开展叶子表层消毒杀菌,在净化工作台选用直徑15 mm的打孔器将其弄成叶盘,将叶盘轻放进相对浓度值的药水中,叶反面朝上,每皿10个叶盘,对照实验选用无菌水替代药水;

(3)打疫苗霜霉菌:将纯塑造后新鮮的霜霉菌配置成浓度值为1 × 106个/ml的胞子混液,滴在叶盘中间,每一个叶盘滴10 μl;

(4)塑造及結果调研:将其放置恒温箱中黑喑解决24 h,随后用灭过菌的过滤纸条将叶盘反面的液体吸去,后放置恒温箱中塑造,7 d后调查报告。依据病发状况分辨抗药性状况。

2、分子生物技术性检验- Taqman-MGB抗药性无损检测技术

依据葡萄霜霉菌对烯酰吗啉和嘧菌酯造成抗药性后产生基因变异的基本原理创建了Taqman-MGB无损检测技术。

(1)试品的收集及解决:将在田里收集的新鮮葡萄霜霉菌病样,在房间内保湿补水塑造新的霉层;

(2)霜霉菌DNA的获取:运用E-Z○R96 Fungal DNA Kit获取检测试剂盒开展获取;

(3)运用已开发设计的Taqman-MGB探头,根据莹光定量PCR检验不一样葡萄种植区霜霉菌的抗药性。

四、检验結果

1.选用叶盘法检验了一部分种植区霜霉菌对甲霜灵、氰霜唑及霜脲氰的抗性状况,此方式对实验设备规定低、实际操作简易、节约原材料、与田里病发反映更为类似。

2. 选用Taqman-MGB分子结构无损检测技术开展了一部分葡萄种植区葡萄霜霉菌对嘧菌酯和烯酰吗啉抗性评定,发觉不一样地域抗性差别显著,辽宁北镇霜霉菌人群对QoI抗性做到100%,而山西省人群QoI抗性頻率为4%。针对CAA类农药杀菌剂,辽宁北镇霜霉菌人群抗性等位基因頻率做到96%,在其中杂合子比较敏感型站到45%,抗性菌种为51%,表明抗性人群已经这一地区快速扩散,此方式可以精确区别野生型,抗药突变型与杂合性型,敏感度做到1pg,而且除开单菌种评定以外,还能够开展混和试品定量分析检验,可以大大的缓解劳动量,提高工作效率,合适于具备莹光定量PCR的试验室运用。

依据检验結果,辽宁北镇种植区不可以再次用嘧菌酯和烯酰吗啉预防霜霉病,提议拆换别的预防霜霉病的药物,并留意持续应用频次,一般同一种药物持续应用不可以超出3次;山西省种植区能够再次应用这二种药物防治葡萄霜霉病,但留意药物间的交替应用。抗药性的检验不但为霜霉病的预防奠定基础,还为化肥精确挑选、有效交替应用农药杀菌剂,减少化肥需求量出示科学研究实施意见。

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